Tärkein ero - Lämmin vs kylmä trypsiinitys
Lämmin ja kylmä trypsinisointi ovat kaksi menetelmää, joita käytetään solujen entsymaattisessa hajottamisessa eläinsoluviljelyssä. Tärkein ero lämpimän ja kylmän trypsiinin välillä, kuten nimistä voi päätellä, riippuu lämpötilasta, jossa trypsiini lisätään solujen hajotusta varten. Lämmin trypsiini tapahtuu korkeammissa lämpötilaolosuhteissa (36,5 - 37 0 C), kun taas kylmä trypsiinointi tapahtuu matalissa lämpötiloissa.
Eläinsolujen primaarisen soluviljelyprosessin aikana on käytetty kolmea päämenetelmää, jotka ovat osoittautuneet onnistuneiksi. Kolme menetelmää sisältävät solujen mekaanisen hajotuksen, solujen entsymaattisen hajotuksen ja ensisijaisen eksplanttimenetelmän. Solujen entsymaattinen hajoaminen, joka johtaa solujen eristämiseen, tapahtuu proteiinia hajottavan trypsiinientsyymin avulla. Siksi tätä prosessia kutsutaan trypsiiniksi. Trypsinisointi voidaan tehdä kahdessa eri olosuhteessa, nimittäin lämmin trypsiinointi ja kylmä trypsiinointi. Lämmin trypsinisaation on menetelmä käsittelemällä soluja trypsiini kuumana lämpötilassa 36,5-37 0C. Kylmä trypsiinointi on trypsiinikäsittelyprosessi, joka tapahtuu kylmemmissä olosuhteissa, mieluiten jäissä hyvin alhaisissa lämpötiloissa.
SISÄLLYS
1. Yleiskatsaus ja keskeinen ero
2. Mikä on lämmin trypsiinitys
3. Mikä on kylmä trypsiinointi
4. Lämpimän ja kylmän trypsiinin yhtäläisyydet
5. Vertailu vierekkäin - Lämmin ja kylmä trypsiinointi taulukkomuodossa
6. Yhteenveto
Mikä on lämmin trypsinisointi?
Trypsinisointi voidaan tehdä solukomponenttien hajottamiseksi solujen eristämiseksi primaarisen soluviljelmän tuottamiseksi. Trypsiini on proteiinin hajoamisen entsyymi, ja trypsiinissä käytetty entsyymiseos voi olla joko raakauute tai puhdistettu tuote. Raakauutteen sanotaan olevan tehokkaampi proteiinien hajoamisessa ja solujen hajoamisessa, koska se sisältää muita hajoavia entsyymejä.
Lämmin trypsiinointi on yleisimmin käytetty entsymaattinen menetelmä solujen hajoamiseen, joka tapahtuu korkeammissa lämpötiloissa. Ennen trypsiinikäsittelyä haluttu kudos pilkotaan pienemmiksi paloiksi. Se helpottaa erittelyprosessia. Leikattu kudos pestään sitten erityisessä väliaineessa, joka tunnetaan nimellä Dissection Basal Salt medium.
Pesuvaiheen päätyttyä solut transformoidaan pulloon, joka sisältää aktiivisen entsyymin, joka on trypsiini. Koska tämä tekniikka edellyttää lämmin trypsinoimalla protokolla, trypsiini sijoitettu lämpötilassa noin 37 0 C: ssa noin neljä tuntia.
Kuva 01: Trypsiini
Sisältö sekoitetaan ja sekoitetaan käyttämällä sentrifugointimenetelmiä protokollan helpottamiseksi ja hajotuksen nopeuttamiseksi. Kun suositeltu aika on saavutettu, solut voidaan johtaa supernatantista. Sitten supernatantista peräisin olevia soluja inkuboidaan tietyssä lämpötilassa ja hetkellä.
Mikä on kylmä trypsinisointi?
Kylmä trypsinisointi on toisenlainen trypsiini, joka tapahtuu kylmissä olosuhteissa. Tässä tekniikassa pilkotut ja pestyt solut laitetaan jääpulloihin ja liotetaan sitten trypsiinillä. Liotusaika on paljon pidempi - noin 6 - 24 tuntia.
Päättymisen jälkeen liotus menettelyn Trypsiini poistetaan solulysaatista, ja kudoksen palaset ovat edelleen inkuboidaan 37 0 C: ssa noin 20-30 minuuttia. Solujen hajoaminen tapahtuu toistuvalla kudosseoksen pipetoinnilla. Tämän avulla solut voivat irtautua membraanista ja tulla supernatanttiin. Kun solut ovat supernatantissa, niitä inkuboidaan ja kasvatetaan haluttuun lämpötilaan ja ajanjaksoon.
Kylmällä trypsiinimenetelmällä on useita etuja
- Elinkelpoisten solujen korkeampi saanto, kun soluvaurio minimoidaan. Soluvauriot minimoidaan olematta käyttämättä sentrifugointivaiheita.
- Erittäin kätevä menetelmä.
- Vähemmän työläs.
Kylmän trypsiinimenetelmän pääasiallinen rajoitus on, että suuria määriä ei voida käyttää yhdessä tapauksessa.
Mitkä ovat yhtäläisyydet lämpimän ja kylmän trypsinisoinnin välillä?
- Sekä lämpimissä että kylmissä trypsiiniprosesseissa käytetään trypsiini-entsyymiä solujen hajottamiseen.
- Sekä lämpimiä että kylmiä trypsiiniprosesseja käytetään soluviljelymenetelmissä solujen hajottamiseksi.
- Sekä lämpimällä että kylmällä trypsiini-käsittelymenetelmällä solut ovat peräisin supernatantista.
Mikä on ero lämpimän ja kylmän trypsiinin välillä?
Erilainen artikkeli keskellä taulukkoa
Lämmin vs kylmä trypsinisointi |
|
| Lämmin trypsinisaation on menetelmä käsittelemällä soluja trypsiini kuumana lämpötilassa 36,5-37 0. | Kylmä trypsiinointi on trypsiinikäsittelyprosessi, joka tapahtuu kylmemmissä olosuhteissa, mieluiten jäissä hyvin alhaisissa lämpötiloissa. |
| Pöytäkirja | |
| Hienonnettu kudos palaset pidetään 37 0 C: ssa jatkuvasti koko menettelyn ajan. | Hienonnettu kudos kappaleet aluksi pidettiin jäillä kylmässä ja sitten pidettiin 37 0. |
| Lämpötila | |
| Lämmin trypsiinisaatio tapahtuu 36,5-37 0 | Kylmää trypsiinoitumista tapahtuu jääkylmissä lämpötiloissa. |
| Aikaa kulutettu | |
| Vähemmän aikaa tarvitaan koko prosessille (noin 4 tuntia) lämpimälle trypsiinille. | Tarvitaan pidempi aika (noin 6 - 24 tuntia) kylmälle trypsiinille. |
| Elinkelpoisten solujen tuotto | |
| Matala lämpimällä trypsiinillä. | Runsaasti kylmää trypsiinoitumista. |
| Sentrifugoinnin käyttö | |
| Sentrifugointi vaaditaan solujen hajottamiseksi lämpimässä trypsiinissä. | Sentrifugointia ei tarvita kylmässä trypsiinissä. |
| Alkuperäinen kudosmäärä trypsinisoimiseksi | |
| Suurempaa määrää kudosta voidaan käyttää lämpimässä trypsiinissä. | Pienempää määrää kudosta voidaan käyttää kylmässä trypsiinissä. |
| Soluvaurio | |
| Korkea sentrifugoinnin vuoksi lämpimässä trypsiinissä. | Vähemmän kylmän trypsiinin vuoksi. |
Yhteenveto - Lämmin vs kylmä trypsinisointi
Trypsinisointi on menetelmä proteiinia hajottavan trypsiini-entsyymin käyttämiseksi primaaristen soluviljelmien hajottamiseen ja valmistamiseen soluviljelyprosessin aikana. Trypsinisoinnissa on kaksi päämenetelmää, jotka perustuvat toimenpiteen aikana käytettyihin lämpötiloihin. Ne ovat lämpimiä ja kylmiä trypsiiniä. Lämmin trypsinisaation suoritetaan 37 0 C, kun taas kylmä trypsinoimalla suoritetaan jääkylmää olosuhteissa. Vaikka kylmän trypsiinin valmistuminen vie kauemmin, sen sanotaan olevan suurempi elinkykyisten solujen saanto. Tämä johtuu siitä, että soluvauriot minimoidaan kylmässä trypsiinissä, koska se ei käytä voimakkaita sentrifugointivaiheita. Tämä on ero lämpimän ja kylmän trypsiinin välillä.
