Tärkein ero - ohimenevä vs. vakaa transfektio
Transfektio on prosessi, joka liittyy eukaryoottisten solujen geeninsiirtoon kemiallisilla tai fysikaalisilla menetelmillä. Transfektio voidaan luokitella kahteen päätyyppiin, nimeltään transientti transfektio ja stabiili transfektio. Siirtymävaiheen aikana mielenkiinnon kohteena oleva geeni ei integroitu isännän genomiin ja ilmentyy ajallisesti isännän sisällä lyhyeksi ajaksi, kun taas vakaan transfektion yhteydessä kiinnostava geeni integroituu isänt genomiin ja sitä ylläpidetään pitkään useiden sukupolvien ajan. Tämä on keskeinen ero transientin ja vakaan transfektion välillä. Molemmissa tapauksissa transfektio onnistuu ja geenit ilmentyvät.
SISÄLLYSLUETTELO
1. Yleiskatsaus ja keskeinen ero
2. Mikä on transientti transfektio
3. Mikä on vakaa transfektio
4. Vertailu rinnakkain - transientti vs. vakaa transfektio
5. Yhteenveto
Mikä on ohimenevä transfektio?
Transfektio on tärkeä väline geenien lisäämiseksi eukaryoottisiin soluihin. Kahden transfektiotyypin joukossa ohimenevä transfektio on yleinen tapa geeninsiirrossa. Vektorin kautta vieraat geenit transformoidaan isäntäsolujen sisällä. Kun vieras DNA tulee isäntäsoluun, sillä on kaksi vaihtoehtoa. Se voi joko integroitua isännän genomiin ja replikoitua, tai pysyä sisällä integroitumatta genomiin. Ohimenevä transfektio osoittaa liitettyjen geenien väliaikaisen ilmentymisen integroimatta isännän genomiin. Geenit ilmentävät ja tuottavat koodattua proteiinia, kunnes solu jakautuu. Integraation kyvyttömyyden vuoksi se ei kuitenkaan voi jäljitellä ja tulla tuleville sukupolville. Tämän tyyppinen transfektio onnistuu lyhyeksi ajaksi. Solunjaon aikana tai joidenkin muiden tekijöiden vuoksi vieras DNA hajoaa. Ohimenevä transfektio näytetään, kun vieras DNA on hyvin käämitetyn DNA: n muodossa.
Kuva 01: Ohimenevä transfektio
Mikä on vakaa transfektio?
Stabiili transfektio osoittaa onnistuneen vieraiden geenien integroinnin isänt genomiin. Kun vieras DNA pääsee isäntäsolun sisälle, osa vieraasta DNA: sta integroituu isänt genomiin ja siitä tulee osa sitä. Siksi myös vieras DNA replikoituu ja siirtyy tuleville sukupolville, kun isänt genomi replikoituu. Tämän tyyppinen transfektio on monimutkainen ja harvinainen. Koska vakaa transfektio genomiin, tämä ominaisuus säilyy pidempään useiden sukupolvien ajan.
Stabiili transfektio on vaikea prosessi ja vaatii tehokkaan DNA: n toimittamisen ja vieras DNA: n solujen hankkimisen sen genomiin. Siksi lineaarinen DNA suosii stabiilia transfektiota kuin pyöreä DNA. Kuitenkin, stabiili transfektio nopeus on suunnilleen 10 4 transformoiduissa soluissa. Stabiili transfektio voidaan havaita selektoitavan markkerin kotransfomaation avulla ja suorittamalla keinotekoinen valinta alustalle.
Kuva 02: Vakaa transfektio
Mitä eroa on ohimenevän ja vakaan transfektion välillä?
Erilainen artikkeli keskellä taulukkoa
Ohimenevä vs. vakaa transfektio |
|
| Vieras DNA ei integroitu isäntägenomiin. | Vieras DNA integroituu isäntägenomiin ja siitä tulee osa sitä. |
| Replikointi isännän sisällä | |
| Ohimenevästi transfektoidut geenit eivät replikoidu isännän sisällä. Siksi geenit eivät välity seuraaville sukupolville. | Geenit lisääntyvät isännässä ja siirtyvät tuleville sukupolville. |
| Geenilausekkeen kesto | |
| Geenit ilmentyvät rajallisen ajanjakson ajan ja sen jälkeen ne tuhoutuvat. | Geeneistä tulee osa genomia ja ilmentyvät sukupolven sisällä pitkäksi ajaksi. |
| Käyttää | |
| Tämä on hyödyllistä tutkittaessa geenien tai geenituotteiden lyhytaikaisen ilmentymisen vaikutuksia. | Tämä on hyödyllistä tutkittaessa geeniekspressioiden vaikutuksia pitkällä aikavälillä. |
| Transfektion havaitseminen | |
| Geenit ilmentyvät ja ne voidaan helposti havaita insertoimalla reportterigeeni. | Vakaa transfektio voidaan havaita helposti lisäämällä valittavissa oleva merkki ja valitsemalla se keinotekoisen valinnan avulla väliaineelle. |
| Tapahtuma ja prosessi | |
| Ohimenevä transfektio on yleistä eikä sen suorittaminen ole monimutkaista. | Vakaa transfektio on harvinaista ja monimutkainen suorittaa. |
| DNA: n luonne | |
| Erittäin superkäämitelty DNA soveltuu ohimenevään transfektioon. | Lineaarinen DNA soveltuu stabiiliin transfektioon. |
| Sovellukset | |
| Tätä käytetään tutkimuksiin geenien pudotuksesta tai hiljentämisestä estävillä RNA: lla, proteiinituotannolla pienessä mittakaavassa | Tätä käytetään proteiinituotantoon laajamittaisissa, pidemmän aikavälin farmakologisissa tutkimuksissa, geeniterapiassa, pitkäaikaisen geneettisen säätelyn mekanismien tutkimuksessa |
Yhteenveto - ohimenevä vs. vakaa transfektio
Väliaikaiset ja stabiilit transfektiot ovat kahden tyyppisiä transfektioita, jotka ilmenevät geenin siirtyessä eukaryoottisiin soluihin ei-viruspohjaisten järjestelmien avulla. Transformoitu vieras DNA ei ole integroitu isännän genomiin ohimenevässä transfektiossa, kun taas se integroituu isänt genomiin stabiilissa transfektiossa. Pyöreällä kelatulla DNA: lla näytetään ohimenevä transfektio, kun taas lineaarinen DNA suosii stabiilia transfektiota. Tämä on ero ohimenevän ja vakaan transfektion välillä. Siirtymäsiirto on kuitenkin yleisempää ja helppoa verrattuna stabiiliin transfektioon. Mutta yhden valinta kahden joukosta riippuu geeninsiirron tarkoituksesta ja tutkimushankkeen kestosta.
