Tärkein ero - SDS-sivu vs. Western Blot
Western blotting on tekniikka, joka havaitsee spesifisen proteiinin proteiininäytteestä. Tämä tekniikka suoritetaan useilla keskeisillä vaiheilla: geelielektroforeesi, blottaus ja hybridisaatio. Natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesi (SDS-sivu) on eräänlainen geelielektroforeesitekniikka, jota käytetään proteiinien erottamiseen niiden koon (molekyylipainon) mukaan. Western blot on erityinen blotting-kalvon arkki, jota käytetään siirtämään sama proteiinimalli SDS-sivulla. Keskeinen ero SDS-sivun ja Western-blotin välillä on se, että SDS-sivu sallii proteiinien erottamisen seoksessa, kun taas Western-blot-analyysin avulla voidaan havaita ja kvantifioida spesifinen proteiini seoksesta. Molemmat ovat hyödyllisiä proteiinianalyysitutkimuksissa.
SISÄLLYSLUETTELO
1. Yleiskatsaus ja keskeinen ero
2. Mikä on käyttöturvallisuustiedotteen sivu
3. Mikä on Western Blot
4. Vertailu rinnakkain - SDS-sivu vs. Western Blot
5. Yhteenveto
Mikä on käyttöturvallisuustiedotteen sivu?
SDS Page on geelielektroforeesitekniikka, jota käytetään proteiinien erottamiseen. Sitä käytetään yleisesti biokemiassa, genetiikassa, rikosteknologiassa ja molekyylibiologiassa. Kun proteiinit on uutettu näytteestä, ne ajetaan geelillä, joka koostuu SDS: stä ja polyakryyliamidista. SDS on anioninen detergentti, jota käytetään proteiinien (denaturointiproteiinien) linearisoimiseksi ja negatiivisen varauksen saamiseksi linearisoiduille proteiineille suhteessa niiden molekyylimassaan. Polyakryyliamidista tulee kiinteä kantaja geelille. Negatiivisesti varatut denaturoidut proteiinit kulkeutuvat kohti laitteen positiivista päätä geelin läpi. Proteiinien koon mukaan siirtymisnopeudet vaihtelevat proteiinien välillä ja erotus tapahtuu. Siksi SDS-sivu on hyödyllinen yksittäisten proteiinien erottamiseksi niiden koon perusteella.
Polyakryyliamidigeelin valmistus proteiinien fraktiointia varten on tärkeä vaihe SDS: ssä. Polyakryyliamidin oikea pitoisuus ja käytetyn silloitusaineen tyyppi vaikuttavat voimakkaasti geelin fysikaalisiin ominaisuuksiin, mikä tekee eri proteiinien varsinaisen erottamisen. Geelin huokoskokoja tulisi hallita tehokkaasti erottamiseksi. SDS-sivua pidetään kuitenkin korkean resoluution proteiinierotustekniikkana.
SDS-sivutekniikalla on merkittävä rajoitus proteiinianalyysissä. Koska SDS denaturoi proteiinit ennen erottamista, se ei salli entsymaattisen aktiivisuuden, proteiineihin sitoutumisvuorovaikutusten, proteiinikofaktorien jne.
Kuva 01: KTT-sivu
Mikä on Western Blot?
Western-blottaustekniikka mahdollistaa spesifisen proteiinin havaitsemisen proteiiniseoksesta ja proteiinin määrän ja molekyylipainon mittaamisen. Western blot on kalvo, jota käytetään blottausprosessin aikana SDS- polyakryyliamidigeelissä olevien proteiinimallien peilikuvan saamiseksi. Western-blottauksessa käytetty membraani koostuu enimmäkseen nitroselluloosasta tai polyvinylideenidifluoridista (PVDF). Kalvoa, johon on siirretty proteiini, voidaan käyttää halutun proteiinin tunnistamiseen. Se vaatii korkealaatuista vasta-ainetta halutun proteiinin havaitsemiseksi hybridisaatiolla. Vasta-aine sitoutuu spesifiseen antigeeniinsä ja paljastaa halutun antigeenin, joka on proteiini.
Proteiinien siirtäminen SDS-polyakryyliamidigeelistä Western-blottaukseen suoritetaan elektroblottaamalla. Se on tehokas ja nopea menetelmä, joka saa proteiinit elektroforeesimaan geelistä ja siirtymään nitroselluloosakalvolle (western blot).
Kuva 02: Western blot
Mitä eroa on SDS-sivulla ja Western Blotissa?
Erilainen artikkeli keskellä taulukkoa
KTT-sivu vs. Western Blot |
|
| SDS Page on geelielektroforeesitekniikka. | Western blot on tekniikka, joka suoritetaan kalvolla spesifisen proteiinin havaitsemiseksi seoksesta. |
| Käyttää | |
| SDS-sivu mahdollistaa proteiinien erottamisen niiden koon mukaan. | Western blot sallii proteiinien siirtämisen SDS-sivugeeliin muuttamatta sen mallia ja mahdollistaa hybridisaation spesifisten vasta-aineiden kanssa. |
| Haitat | |
| Proteiinien denaturoituminen, korkeat kustannukset ja neurotoksiinikemikaalien läsnäolo ovat tämän tekniikan haittoja. | Tämä tekniikka on aikaa vievää ja vaatii hyvin kokeneita henkilökohtaisia ja erityisiä hallittuja olosuhteita. |
Yhteenveto - käyttöturvallisuustiedotteen sivu vs. Western Blot
SDS-sivu ja Western blot ovat kaksi menetelmää, jotka liittyvät proteiinianalyysiin. SDS Page mahdollistaa proteiinien helpon erottamisen geelillä niiden molekyylipainon mukaan. Western blot auttaa vahvistamaan spesifisen proteiinin läsnäolon ja määrän hybridisoimalla spesifisten vasta-aineiden kanssa. Tämä on ero SDS-sivun ja Western blotin välillä.
