Tärkein ero - Phusion vs Taq Polymerase
DNA-polymeraasit ovat laajalti käytettyjä entsyymejä molekyylibiologian tekniikoissa, ja niitä on myös luonnossa kaikissa organismeissa, joille tehdään DNA-replikaatio. Ne ovat keskeisiä polymeroivia entsyymejä, joita esiintyy replikaation aikana. DNA-polymeraasi pystyy lisäämään nukleotideja DNA-juosteen vapaaseen 3'-päähän aiheuttaen siten uuden juosteen jatkeen. Tällä hetkellä sairausdiagnostiikassa ja teollisissa sovelluksissa tapahtuvan molekyylibiologian kehityksen vuoksi on tärkeää valmistaa polymeraaseja, joilla on useita hyödyllisiä ominaisuuksia. Tämä lisää menetelmän tarkkuutta ja tekee siitä nopeamman tekniikan. Fuusio- ja Taq-polymeraasi ovat kaksi kaupallisesti tuotettua lämpöstabiilia polymeraasientsyymiä, joita käytetään erityisissä molekyylisovelluksissa. Fuusio on DNA-polymeraasi, joka on eristetty Pyrococcus furiosuksesta, ja sitä käytetään pääasiassa kloonauskokeissa uskollisuuden lisäämiseksi. Taq-DNA-polymeraasi on standardi DNA-polymeraasi, jota käytetään polymeraasiketjureaktiossa (PCR), ja se on eristetty lämpöstabiilista bakteerista; Thermus aquaticus. Tärkein ero näiden kahden entsyymin välillä on lähde-mikro-organismi. Fuusio eristetään Extremophilestä, Pyrococcus furiosuksesta, kun taas Taq-polymeraasi eristetään termofiilistä, Thermus aquaticus. Taq-polymeraasi eristetään termofiilistä Thermus aquaticus. Taq-polymeraasi eristetään termofiilistä Thermus aquaticus.
SISÄLLYS
1. Yleiskatsaus ja keskeinen ero
2. Mikä on fuusio
3. Mikä on Taq-polymeraasi
4. Fuusion ja Taq-polymeraasin yhtäläisyydet
5. Vertailu vierekkäin - Phusion vs Taq-polymeraasi taulukkomuodossa
6. Yhteenveto
Mikä on Phusion?
Fuusio-DNA-polymeraasi on uusi polymeraasi, jota valmistetaan eristämällä entsyymi Pyrococcus furiosuksesta, joka on ekstremofiilinen Archaea. Nämä mikrobit asuvat erittäin korkeassa lämpötilassa, mikä tekee polymeraasista erittäin lämpöstabiilin polymeraasin. Fuusiopolymeraasia käytetään äärimmäisen tarkkuuden saamiseksi tavanomaiseen lämpöstabiiliin polymeraasiin; Taq-polymeraasi. Fuusiopolymeraasi pystyy monistamaan pitkiä templaatteja jopa 7,5 kiloon genomista DNA: ta. Optimaalinen polymerointi kapasiteetti Phusion polymeraasi on 72 0 C: ssa Phusion käytetään myös kloonaus tuotteiden sekvensointi, ilmentymisen analyysi ja mutaation analyysi.
Fuusio-DNA-polymeraasilla on 3 '- 5' eksonukleaasiaktiivisuus. Tämä mahdollistaa vasta syntetisoidun juosteen oikolukemisen synteesin jälkeen. Näin ollen nukleotidien ristiriidat voidaan helposti korjata. Siten sillä on pienempi virhesuhde. Phusion-polymeraasin yleiset edut ovat;
- Äärimmäinen uskollisuus
- Suuri nopeus ja lyhyt jatkoaika
- Vankat reaktiot ja vaatii vain vähän optimointia
- Korkea tuotto
Kuva 01: Fuusio
Fuusiopolymeraasin tärkein haittapuoli on, että se estetään deoksiuridiinitrifosfaatin (dUTP) läsnä ollessa. Kun dUTP: itä kertyy reaktioseokseen, se voi estää fuusiopolymeraasin vaikutuksia. Tämä estetään käsittelemällä reaktioseos dUTPaasilla ennen entsyymin lisäämistä. Tällä hetkellä Phusion-polymeraasin dUTP-vastustuskykyistä muunnosta, joka tunnetaan nimellä Pfu Turbo, käytetään Phusion-polymeraasin sijasta tämän ongelman korjaamiseksi.
Mikä on Taq Polymerase?
Taq-DNA-polymeraasikeksintö on mullistanut molekyylibiologian. Se ratkaisi suuren ongelman DNA-monistuksessa. Taq-DNA-polymeraasi on lämpöstabiili polymeraasientsyymi, joka uutetaan ja eristetään termofiilisestä Thermus aquaticus -bakteerista. Tämän entsyymin löytäminen johtaa PCR: n kehittymiseen. Tämä entsyymi on sallinut polymeraasiketjureaktion käytön DNA-monistuksessa tavanomaisten työläiden kloonausmenetelmien sijaan. PCR: ää käytetään nyt molekyylidiagnostiikassa, maataloudessa ja teollisuudessa, ja tekniikkaan on lisätty monia uusia muunnelmia.
Kuva 02: Taq-polymeraasi
Taq DNA-polymeraasin toiminnot optimaalinen lämpötila-alueella välillä 72 0 C - 80 0 C: ssa Taq DNA-polymeraasin edellyttää kofaktori; magnesium sen toiminnalle. Taq-polymeraasilla ei ole 3 '- 5' -korjauskykyä, joten Taq-DNA-polymeraasin virhesuhde on korkea verrattuna uudempiin DNA-polymeraasityyppeihin, kuten fuusiopolymeraasiin jne. Mutta Taq-DNA-polymeraasin suosio on edelleen sama koko tiedemaailmassa entsyymin mukavuuden ja joustavuuden vuoksi.
Mitkä ovat fuusion ja Taq-polymeraasin yhtäläisyydet?
- Sekä Phusion- että Taq-polymeraasientsyymit ovat polymeroivia entsyymejä, jotka pystyvät lisäämään nukleotideja DNA-juosteen 3'-vapaaseen päähän.
- Sekä Phusion- että Taq-polymeraasit vaativat alukesekvenssin polymeroinnin aloittamiseksi.
- Sekä Phusion- että Taq-polymeraasit ovat lämmönkestäviä.
- Sekä Phusion- että Taq-polymeraaseja käytetään PCR-mekanismeissa DNA: n monistamiseksi.
- Kun polymeraasia lisätään reaktioseokseen, sekä Phusion- että Taq-polymeraaseja lisätään viimeisenä entsyymin tehokkuuden varmistamiseksi.
- Sekä Phusion- että Taq-polymeraasit syntetisoidaan kaupallisesti molekyylibiologian kokeellisiin tarkoituksiin.
- Sekä Phusion- että Taq-polymeraasit vaativat kofaktorin toimintansa loppuunsaattamiseksi.
Mikä on ero fuusion ja Taq-polymeraasin välillä?
Erilainen artikkeli keskellä taulukkoa
Phusion vs Taq-polymeraasi |
|
| Fuusio on DNA-polymeraasi, joka on eristetty Pyrococcus furiosuksesta, ja sitä käytetään pääasiassa kloonauskokeissa uskollisuuden lisäämiseksi. | Taq-DNA-polymeraasi on standardi DNA-polymeraasi, jota käytetään polymeraasiketjureaktiossa (PCR), ja se eristetään lämpöstabiilista bakteerista, Thermus aquaticuksesta. |
| Lähdeorganismi | |
| Fuusio uutetaan ekstremofiilisistä arkeista - Pyrococcus furiosus. | Nämä kirjalliset teokset ulottuvat kolonisaatiokaudesta dekolonisaatiojaksoon. |
| Oikeudenkäyntikyky | |
| 3 - 5 'todistuskykyä on Phusionissa. | Taq-polymeraasissa ei ole 3 '- 5' todistuskykyä. |
| Uskollisuus | |
| Phusionilla on korkea uskollisuus. | Taq-polymeraasilla on alhainen tarkkuus. |
| Vahvistus | |
| Phusion pystyy monistamaan pitkiä DNA-fragmentteja. | Taq-polymeraasi pystyy monistamaan paljon lyhyempiä DNA-fragmentteja. |
| dUTP-myrkytys | |
| Pariton kumulaatio estää fuusiotoiminnan. | Dupt ei estä Taq-polymeraasia. |
Yhteenveto - Phusion vs Taq-polymeraasi
Phusion ja Taq DNA-polymeraasi ovat kaksi lämpöstabiilia polymeraasia, joita käytetään PCR-tekniikoissa. Fuusio on polymeraasi, joka on eristetty ääripäästä, Pyrococcus furiosus, kun taas Taq on eristetty lämpöstabiilista Thermus aquaticus -bakteerista. Taq-DNA-polymeraasin löytö johtaa PCR-keksintöön. Phusionilla on monia etuja Taqiin verrattuna, mikä on tehnyt Phusionista paremman vaihtoehdon erittäin tarkan DNA: n tuottamiseksi. Taq-polymeraasia käytetään kuitenkin edelleen standardina polymeraasientsyyminä PCR: ssä. Tämä on ero Phusionin ja Taq-polymeraasin välillä.
