Keskeinen ero - suora tai epäsuora ELISA
Entsyymiin liittyvä immuunimääritys (ELISA), joka tunnetaan myös nimellä entsyymi-immunomääritys, on serologinen testi, joka havaitsee veressä olevat vasta-aineet. Sitä käytetään diagnostiikkatyökaluna sen selvittämiseen, onko potilas altistunut tietyntyyppiselle virukselle tai muulle tartuntataudille (antigeenille) ja onko keho tuottanut vasta-aineita infektiota vastaan. ELISA voi myös tunnistaa menneet ja nykyiset infektiot. Siksi lääkärit käyttävät ELISA: ta usein esiseulontatestinä ennen sairauksien perusteellista analysointia. Tämä testi voidaan suorittaa laboratoriossa ottamalla potilaalta verinäyte. ELISA-testiä on kahta tyyppiä: suora ELISA ja epäsuora ELISA. Keskeinen ero suoran ja epäsuoran ELISA: n välillä on, että epäsuora ELISA on herkempi ja vaatii sekundäärisen vasta-aineen lisäämistä, kun taas suora ELISA on vähemmän herkkä ja käyttää vain primaarista vasta-ainetta.
SISÄLLYSLUETTELO
1. Yleiskatsaus ja keskeinen ero
2. Mikä on suora ELISA
3. Mikä on epäsuora ELISA
4. Vertailu rinnakkain - suora tai epäsuora ELISA
5. Yhteenveto
Mikä on suora ELISA?
ELISA on tautidiagnostiikkatesti, joka tehdään tiettyjen antigeenien tai vasta-aineiden läsnäolon tunnistamiseksi veressä. Se tehdään levyanalyysinä. Se käyttää vasta-aineita, jotka on liitetty helposti määritettäviin entsyymeihin. Antigeenien läsnäolo seeruminäytteessä sitoutuu spesifisiin vasta-aineisiin, jotka on kytketty entsyymeihin. Viimeisessä vaiheessa lisätään spesifinen substraatti reagoimaan entsyymin kanssa. Entsyymi muuntaa substraatin värilliseksi tai signaalia tuottavaksi tuotteeksi. Kemiallisen substraatin värimuutos paljastaa tietyn vasta-aineen läsnäolon seeruminäytteessä. Suorassa ELISA-testissä käytetään vain primaarista vasta-ainetta, joka on kytketty entsyymiin. Sitoutuessaan antigeeniin se muuttaa nopeasti väriä, mikä osoittaa tarttuvan aineen läsnäolon veressä. Kuitenkin,signaalien voimakkuus on heikompi suorassa ELISA-tutkimuksessa, koska epitoopit rajoittuvat antigeenien sitoutumiseen. Siksi suora ELISA on vähemmän herkkä kuin epäsuora ELISA.
Kuva 01: Suora ELISA-testi
Mikä on epäsuora ELISA?
ELISA voidaan suorittaa käyttämällä kahden tyyppisiä vasta-aineita, nimittäin; primaarivasta-aine ja toissijainen vasta-aine. Epäsuora ELISA-työkalu käyttää molempia vasta-ainetyyppejä signaalien monistamiseksi paremman havaitsemisen varmistamiseksi. Epäsuora ELISA-tekniikka suoritetaan seuraavasti.
- Levyjä inkuboidaan antigeenien kanssa ja pestään epäspesifisen sitoutumisen estämiseksi.
- Sitten lisätään primaarisia vasta-aineita ja pestään.
- Entsyymiin sidottu sekundaarinen vasta-aine lisätään ja pestään.
- Substraatti lisätään ja annetaan reagoida entsyymien kanssa.
- Signaalit havaitaan ja näytteessä tunnistetaan spesifisen antigeenin läsnäolo tai puuttuminen.
Epäsuorassa ELISA-testissä useat sekundaariset vasta-aineet voivat sitoutua yhteen primaariseen vasta-aineeseen. Sekundaariset vasta-aineet ovat yhteydessä helposti määritettäviin entsyymeihin. Siksi yksi sitoutuminen voi antaa voimakkaan signaalin useamman kuin yhden vuorovaikutuksen vuoksi. Siksi epäsuora ELISA on herkempi kuin suora ELISA. Epäsuora ELISA voi kuitenkin tuottaa epäspesifisiä signaaleja sekundääristen vasta-aineiden ristireaktioiden vuoksi.
Kuva 02: Epäsuora ELISA-testi
Mitä eroa on suoralla ja epäsuoralla ELISAlla?
Erilainen artikkeli keskellä taulukkoa
Suora vs epäsuora ELISA |
|
| Suora ELISA on vähemmän herkkä kuin epäsuora ELISA. | Epäsuora ELISA on herkempi. |
| Aika | |
| Suora ELISA-testi on nopea prosessi. | Epäsuora ELISA on aikaa vievää. |
| Vasta-aineiden käyttö | |
| Suorassa ELISA-tutkimuksessa käytetään vain yhtä vasta-ainetyyppiä (primaarisia vasta-aineita). | Primaarisia ja sekundaarisia vasta-aineita käytetään epäsuoraan ELISA-testiin. |
| Yhteys entsyymeihin | |
| Primaariset vasta-aineet ovat yhteydessä entsyymeihin. | Sekundaariset vasta-aineet ovat yhteydessä entsyymeihin. |
| Toisten vasta-aineiden ristireaktiivisuus | |
| Suora ELISA eliminoi toisen vasta-aineen ristireaktiivisuuden. | Epäsuoraan ELISAan vaikuttaa toisen vasta-aineen ristireaktiivisuus. |
| Signaalit | |
| Signaalit ovat heikkoja verrattuna epäsuoraan ELISA-testiin. | Signaalit vahvistetaan epäsuoralla ELISA-menetelmällä. Siksi se on helppo havaita. |
Yhteenveto - Suora vs Epäsuora ELISA
ELISA on biokemiallinen tekniikka, jota käytetään pääasiassa immunologiassa vasta-aineen tai antigeenin läsnäolon havaitsemiseksi potilaan verinäytteessä. Se voidaan suorittaa kahdella suoralla tai epäsuoralla ELISA-menetelmällä. Suora ELISA-testi käyttää vain primaarisia vasta-aineita antigeenin havaitsemiseen, kun taas epäsuora ELISA käyttää sekä primaarisia että sekundaarisia vasta-aineita. Suorassa ELISA: ssa primääriset vasta-aineet leimataan, kun taas epäsuorassa ELISA: ssa sekundaariset vasta-aineet leimataan. Tämä on ero suoran ja epäsuoran ELISAn välillä.
