Tärkein ero - DNA vs. RNA-uutto
DNA: n ja RNA: n tutkimus on välttämätöntä molekyylibiologian, biotekniikan ja genetiikan peruskäsitteiden ymmärtämiseksi. Puhtaiden DNA- ja RNA-näytteiden uuttaminen on välttämätöntä kokeellisten menettelyjen suorittamiseksi näiden tutkimusten aikana. Keskeinen ero DNA: n ja RNA: n uuttamisen välillä on, että DNA: n uuttoprosessi puhdistaa DNA: n, kun taas RNA: n uutto puhdistaa RNA: n. DNA: n uuttoprosessilla on kolme erilaista vaihetta: solujen hajoaminen ja kalvolipidien ja -proteiinien katabolia, kataboliittien kasautuminen väkevällä suolaliuoksella ja DNA: n saostaminen etanolilla. Kolmivaiheinen menettely voi koostua kahdesta valinnaisesta vaiheesta. RNA: n puhdistusprosessi koostuu neljästä eri vaiheesta: guanidiumtiosyanaatin lisääminen solujen hajoamista varten, proteiinien denaturointi mukaan lukien ribonukleaasit,RNA: n erottaminen lisäämällä kloroformia ja fenolia ja pesemällä sakka etanolilla.
SISÄLLYS
1. Yleiskatsaus ja keskeinen ero
2. Mikä on DNA: n uuttaminen
3. Mikä on RNA: n uuttaminen
4. DNA: n ja RNA: n uuttamisen yhtäläisyydet
5. Vertailu vierekkäin - DNA vs. RNA-uutto taulukkomuodossa
6. Yhteenveto
Mikä on DNA: n uuttaminen?
DNA: n uuttaminen on fysikaalinen ja kemiallinen prosessi, jota käytetään DNA: n puhdistamiseen näytteestä. DNA: n uuttaminen on tärkeä näkökohta molekyylibiologian ja rikosteknisten tieteiden yhteydessä. Prosessi on kolme perusvaihetta. Aluksi kiinnostavat solut olisi hankittava. Seuraavaksi solujen hajoamista helpotetaan solukalvon hajottamiseksi, mikä avaa solun ja paljastaa sytoplasman yhdessä DNA: n kanssa. Pinta-aktiivisia aineita tai muita detergenttejä voidaan käyttää lipidien hajottamiseen solukalvosta samalla kun läsnä olevat proteiinit kataboloidaan proteaasien avulla. Tämä on valinnainen vaihe. Kun solu on hajonnut, kataboloitujen molekyylien kasautumista helpotetaan väkevöityillä suolaliuoksilla. Sitä seuraa liuoksen sentrifugointi, joka erottaa roskat rypyt DNA: sta. Tässä vaiheessaerilaistunut DNA sekoitetaan solusyklin aikana käytettyjen reagenssien ja suolojen kanssa.
Kuva 01: DNA: n uuttaminen
Sen puhdistamiseksi edelleen voidaan käyttää seuraavia vaiheita. Yksi menetelmä on etanolisaostus, johon kuuluu jääkylmän etanolin sekoittaminen erotetun DNA-näytteen kanssa. DNA on liukenematon alkoholiin ja tuottaa siten pelletin johtuen DNA-molekyylien aggregaatiosta. Natriumasetaattia lisätään tässä prosessissa saostumisasteen parantamiseksi lisäämällä ionivahvuutta. Etanolisaostusprosessin lisäksi tähän voitaisiin indusoida myös fenoli-kloroformiuutto. Tässä menetelmässä fenoli denaturoi näytteessä olevat proteiinit. Sentrifugoituaan denaturoidut proteiinit pysyvät orgaanisessa faasissa, kun taas kloroformiin sekoitettuja DNA-molekyylejä on vesifaasissa. Kloroformi poistaa fenolijäämät. Kun uuttaminen on valmis,DNA pidetään liuotettuna TE-puskuriin tai erittäin puhtaaseen veteen.
Mikä on RNA-uutto?
RNA: n puhdistus on prosessi, jolla RNA puhdistetaan biologisesta näytteestä. Ribonukleaasin läsnäolon vuoksi soluissa ja kudoksissa tämä prosessi on monimutkainen. Ribonukleaasientsyymillä on kyky hajottaa RNA nopeasti. Ribonukleaasien kemiallinen luonne on erittäin vakaa, ja niitä on vaikea inaktivoida. Ribonukleaasien neutralointi on vaihtoehto. Koska tämä entsyymi on läsnä soluissa ja kudoksissa, kehitetään erityisiä tekniikoita RNA: n uuttamiseksi. Monista menetelmistä yleinen menetelmä on guanidiniumtiosyanaatti-fenoli-kloroformiuutto.
Kuva 02: RNA-uutto
Guanidiniumtiosyanaatti-fenoli-kloroformi-uuttomenetelmä riippuu sentrifugoinnista ja faasierotuksesta. Sentrifugoitava seos koostuu vesinäytteestä ja vedellä kyllästetystä liuoksesta, joka koostuu fenolista ja kloroformista. Sentrifugoitu liuos koostuu ylemmästä vesifaasista ja alemmasta orgaanisesta faasista neutraaleissa pH-olosuhteissa (pH 7-8). RNA: ta on vesifaasissa. Orgaaninen faasi koostuu tyypillisesti fenoliin liuotetuista proteiineista ja kloroformiin liuotetuista lipideistä. Lisätään kaotrooppinen aine (molekyyli, jolla on kyky katkaista vesimolekyylien väliset vetysidokset); tämä tunnetaan nimellä guanidiniumtiosyanaatti. Tällä aineella on kyky denaturoida proteiineja, jotka sisältävät ribonukleaaseja, jotka voivat hajottaa RNA: ta ja osallistuvat solujen hajoamiseen. Se erottaa myös rRNA: n ribosomaalisista proteiineista. RNA-puhdistuksen viimeinen vaihe on vesifaasin saostumisen peseminen etanolilla. RNA voidaan puhdistaa myös käyttämällä nestemäistä typpeä.
Mitkä ovat yhtäläisyydet DNA: n ja RNA: n uuttamisen välillä?
- Molemmat uuttoprosessit käyttävät haitallisia kemikaaleja, kuten fenolia ja kloroformia.
- Sentrifugointi on olennainen tekniikka molemmille prosesseille.
- Etanolia käytetään sakan pesemiseen ja puhdistetun DNA: n tai RNA: n saamiseen.
Mikä on ero DNA: n ja RNA: n uuttamisen välillä?
Erilainen artikkeli keskellä taulukkoa
DNA vs. RNA-uutto |
|
| DNA: n uuttaminen on prosessi, joka uuttaa DNA: ta organismista tai näytteestä. | RNA: n uuttaminen on prosessi, jossa uutetaan RNA näytteestä. |
| Askeleet | |
| DNA: n uuttoprosessi koostuu kolmesta eri vaiheesta ja kahdesta valinnaisesta vaiheesta. | RNA-uuttoprosessi koostuu neljästä eri vaiheesta. |
| Reagenssit | |
| Pinta-aktiivisia aineita, proteaaseja (valinnainen), alkoholia, kloroformia, fenolia, natriumasetaattia käytetään DNA: n uuttamiseen. | RNA-uuttamiseen käytetään guanidiumtiosyanaattia, kloroformia, fenolia ja etanolia. |
Yhteenveto - DNA vs. RNA-uutto
DNA: n ja RNA: n uuttaminen ovat olennaisia näkökohtia kokeellisissa menettelyissä molekyylibiologian, genetiikan ja biotekniikan tutkimiseen. Molemmat prosessit sisältävät samankaltaisia reagensseja, mutta RNA-uuttaminen käyttää erityistä reagenssia, joka tunnetaan nimellä guanidiumtiosyanaatti, mikä vähentää ribonukleaasien aktiivisuutta. Tämä on tärkein ero DNA: n ja RNA: n uuttamisen välillä.
Lataa PDF-versio DNA: n ja RNA: n uuttamisesta
Voit ladata tämän artikkelin PDF-version ja käyttää sitä offline-tarkoituksiin lainausviestin mukaan. Lataa PDF-versio täältä Ero DNA: n ja RNA: n uuttamisen välillä
