Ero Bentsonaasin Ja DNaasin Välillä

2024 Kirjoittaja: Mildred Bawerman | [email protected]. Viimeksi muokattu: 2023-12-16 08:38

Tärkein ero - bentsonaasi vs. DNaasi

Nukleiinihappojen hajoaminen on tärkeää monille molekyylibiologian tekniikoille. Sitä käytetään laajasti rekombinantti-DNA-tekniikassa eroon ei-toivotuista DNA- ja RNA-fragmenteista. Nukleiinihappoa hajottavia entsyymejä kutsutaan nukleaaseiksi, ja ne voivat olla erityyppisiä vaaditun toiminnan perusteella. DNA: ta hajottavat nukleaasit tunnetaan DNaaseina, kun taas ne, jotka hajottavat RNA: ta, tunnetaan RNaaseina. Näitä entsyymejä käytetään enimmäkseen in vitro -kokeissa, joissa suoritetaan in vitro molekyylitestit puhtaan DNA: n, RNA: n tai proteiinien eristämiseksi. Bentsonaasit ovat eräänlaisia nukleaaseja, jotka hajottavat sekä DNA: ta että RNA: ta, kun taas DNaasit hajottavat vain DNA: ta. Tämä on tärkein ero bentsonaasin ja DNaasin välillä.

SISÄLLYS

1. Yleiskatsaus ja keskeinen ero

2. Mikä on bentsonaasi

3. Mikä on DNaasi

4. Bentsonaasin ja DNaasin yhtäläisyydet

5. Vertailu rinnakkain - bentsonaasi vs. DNaasi taulukkomuodossa

6. Yhteenveto

Mikä on Benzonase?

Bentsonaasi on geneettisesti muokattu endonukleaasi Serratia marcescensistä. Tätä entsyymiä tuotetaan E. coli -isännissä teollisessa mittakaavassa. Bentsonaasi pystyy pilkkomaan kaksijuosteisen DNA: n, lineaarisen DNA: n, pyöreän DNA: n ja yksijuosteisen RNA: n. Siksi bentsonaasi on kaupallisesti tärkeä. Bentsonaasientsyymi on proteiinidimeeri, jossa on 245 identtistä aminohappoa, ~ 30 kDa: n alayksiköitä, joissa on kaksi välttämätöntä disulfidisidosta. Bentsonaasi katkaisee nukleiinihapot sen 5'-päästä ja johtaa fragmentteihin, joissa on vapaita 5'-päitä. Bentsonaasi voi katkaista nukleiinihapot missä tahansa sekvenssissä, mutta se mieluummin pitää GC-rikkaita alueita.

Bentsonaasille varastoidaan -20 ⁰ C: ssa pH-optimi entsyymin aktiivisuuden havaitaan olevan 8,0-9,2. Bentsonaasin sovelluksiin sisältyy näytteen valmistaminen proteiini 2D -geelielektroforeesille, jossa bentsonaasi poistaa sitoutuneet nukleiinihapot ja nukleiinihappokontaminanttien poisto rekombinanttiproteiinivalmisteista. Sitä käytetään myös vähentämään proteiiniuutteiden viskositeettia ja estämään solujen kasautuminen soluseokseen.

Mikä on DNase?

DNaasi on nukleaasi, hydrolyyttinen entsyymi, joka pystyy pilkkomaan vain kaksijuosteisen DNA: n. DNaaseja on kahta päätyyppiä: DNaasi I ja DNaasi II. DNaasi I osallistuu kaksijuosteisen DNA: n pilkkomiseen polynukleotidien tuottamiseksi 5'-vapailla päillä. DNaasi II osallistuu kaksijuosteisen DNA: n pilkkomiseen polynukleotidisäikeiden tuottamiseksi, joissa on 3 'vapaata päätä tai ulkonemaa.

DNaasi I

DNaasi I toimii optimaalisella pH-arvolla välillä 7,0 - 8,0. Entsyymiaktiivisuus riippuu monista ionikofaktoreista, joihin kuuluvat Ca2 ⁺, Mg2 ⁺ tai Mn2 ⁺. Mg ^{2+: n} ja Mn ^{2+: n} aktiivisuus päättää DNaasi I: n toiminnan. Mg ^2+: n läsnä ollessa DNaasi I katkaisee kunkin dsDNA-juosteen itsenäisesti. Tämä tapahtuu satunnaisella tavalla. Sitä vastoin Mn2 ⁺: n läsnä ollessa entsyymi katkaisee molemmat DNA-juosteet suunnilleen samassa kohdassa. Tämä pilkkominen johtaa kahden tyyppisten DNA-fragmenttien tuottamiseen; yksi tyyppi tylpillä päillä ja toinen tyyppi yhdellä tai kahdella nukleotidien ulokkeella.

Kuva 02: DNaasi

DNaasi II

DNaasi II toimii optimaalisella pH-arvolla 4,5-5,0 ja sen aktiivisuuteen tarvitaan kaksiarvoisia metalli-ioneja, samanlainen kuin DNaasi I. DNaasi II: n mekanismin tiedetään koostuvan kolmesta päävaiheesta.

1. Useita yhden juosteen katkoksia indusoidaan DNA-rungossa.
2. Tuotetaan happoliukoisia nukleotideja ja oligonukleotideja.
3. Epälineaarinen hyperkrominen muutos tapahtuu viimeisessä vaiheessa.

DNaasientsyymin pääasiallisia estäjiä ovat metallikelaattorit, siirtymämetallit ja kemikaalit, kuten natriumdodekyylisulfaatti ja β-merkaptoetanoli.

DNaasin pääasiallisia sovelluksia ovat DNA-vapaiden RNA-uutteiden ja proteiiniuutteiden valmistus ja templaatti-DNA: n poisto in vitro -transkriptiokokeiden aikana.

Mitkä ovat bentsonaasin ja DNaasin yhtäläisyydet?

• Molemmat ovat hydrolyyttisiä entsyymejä.
• Molemmat ovat nukleaaseja.
• Molemmat osallistuvat katkaisemalla nukleiinihappojen fosfodiesterisidokset.
• Molemmat vaativat optimaalisen pH: n ja varastointilämpötilat entsyymin aktiivisuuden ylläpitämiseksi.
• Entsyymien estäjiin kuuluvat kelatoivat aineet, siirtymämetallit ja pesuainekemikaalit.
• Sovellukset keskittyvät pääasiassa erittäin puhtaiden DNA-, RNA- ja proteiiniuutteiden saamiseen.
• Molempia entsyymejä voidaan tuottaa geenitekniikan avulla.

Mikä on ero bentsonaasin ja DNaasin välillä?

Erilainen artikkeli keskellä taulukkoa

Bentsonaasi vs DNaasi
Bentsonaasi on entsyymi, joka pystyy pilkkomaan kaksijuosteisen DNA: n, lineaarisen DNA: n, pyöreän DNA: n ja RNA: n.	DNaasi on entsyymi, joka pystyy pilkkomaan kaksijuosteisen DNA: n.
Entsyymin substraatti
Sekä DNA että RNA ovat substraatteja bentsonaasille.	DNA on DNaasin substraatti.
Rakenne
Bentsonaasin optimaalinen pH-alue on 7,0 - 8,0	DNaasi I: n optimaaliset pH-alueet ovat 7,0 - 8,0 ja DNaasi II ovat 4,5 - 5,0.

Yhteenveto - bentsonaasi vs. DNaasi

Nukleaasientsyymejä käytetään laajalti erilaisissa kokeellisissa menettelyissä molekyylibiologian ja geenitekniikan suhteen. Bentsonaasi ja DNaasi ovat kahden tyyppisiä nukleaaseja. Bentsonaasi osallistuu sekä DNA: n että RNA: n hajottamiseen, kun taas DNaasi on mukana kaksijuosteisen DNA: n pilkkomisessa. Tämä on perusero bentsonaasin ja DNaasin välillä. Tällä hetkellä molemmat näistä nukleaasityypeistä tuotetaan yhdistelmä-DNA-tekniikalla, joka tuottaa korkealaatuisempia entsyymejä, jotka on optimoitu maksimaaliseen tuotantoon.

Lataa PDF-versio Benzonase vs DNase

Voit ladata tämän artikkelin PDF-version ja käyttää sitä offline-tarkoituksiin lainausviestin mukaan. Lataa PDF-versio täältä Bentsonaasin ja DNaasin välinen ero