PCR vs reaaliaikainen PCR
PCR- tai polymeraasiketjureaktio on mullistettu löytö modernissa molekyylibiologiassa, jonka kemisti Kary Mullis kehitti ensimmäisen kerran vuonna 1983. Se sallii yhden sekvenssin monimutkaisessa DNA: ssa monistamisen analyysia varten. PCR: n perusajatus on, että kaksi aluketta, jotka ovat komplementaarisia DNA-sekvenssin vastakkaisille säikeille, on suunnattu toisiaan kohti; alukkeet tuottavat komplementaarisia säikeitä, joista kukin sisältää toisen alukkeen. Tuloksena on siis suuri määrä sekvenssiä, joka vastaa DNA: ta, joka on kahden alukkeen välissä. DNA-polymeraasientsyymiä käytetään alukkeiden pidentämiseen PCR: ssä. DNA-polymeraasi on termostabiili entsyymi, ja sillä on kyky selviytyä korkeissa lämpötiloissa (94-95 ° C), joita käytetään matriisi-DNA: n denaturointiin.
PCR sisältää kolme vaihetta, nimittäin toistuvat denaturointikierrokset, alukkeiden hehkutus ja DNA: n synteesi. Tämän reaktion suorittamiseen käytetään lämpösyklilaitetta, jotta se voidaan ohjelmoida muuttamaan lämpötilaa nopeasti ja tarkasti. PCR: n sovelluksia ovat rikostutkinta, DNA-sormenjälki, taudinaiheuttajien havaitseminen ja varhaisten ihmislajien DNA: n analysointi.
Mikä on perinteinen PCR?
Perinteisessä PCR: ssä on kolme päävaihetta: DNA-monistusvaihe, PCR: n erottaminen ja tuotteiden havaitseminen. DNA-segmenttien erotus tehdään tyypillisesti agaroosigeelielektroforeesilla. Tuotteet värjätään sitten etheidiimibromidilla. Lopuksi havaitseminen saavutetaan visualisoimalla nauhat geeleille UV-valossa. Siksi tavanomaisen PCR: n lopputuloksia ei ilmaista numeroina. Normaalisti tavanomainen PCR pystyy havaitsemaan vain yhden parametrin.
Mikä on reaaliaikainen PCR?
Reaaliaikainen PCR voi havaita tuotteiden monistumisen, kun tuotteet syntetisoidaan. Teknologian kehittyessä PCR: stä on tullut erittäin suosittu tekniikka erityisesti bakteerien havaitsemiseksi ja tunnistamiseksi elintarvikkeissa. Reaaliaikainen PCR käyttää fluoresoivaa väriainejärjestelmää ja lämpösyklia, joka on varustettu fluoresoivalla ilmaisukyvyllä.
Mitä eroa on tavanomaisella PCR: llä ja reaaliaikaisella PCR: llä?
• Tavanomainen PCR on enemmän aikaa vievä, koska se käyttää geelielektroforeesia analysoimaan monistetut PCR-tuotteet. Sitä vastoin reaaliaikainen PCR on vähemmän aikaa vievä, koska se voi havaita amplifikaatiot reaktion alkuvaiheissa.
• Reaaliaikainen PCR kerää dataa PCR: n eksponentiaalisessa kasvuvaiheessa, kun taas perinteinen PCR kerää tietoja reaktion loppupisteessä.
• Tavanomaisen PCR: n loppupistetulokset eivät välttämättä ole kovin tarkkoja, mutta reaaliaikaisen PCR: n tulokset ovat hyvin tarkkoja.
• Reaaliaikainen PCR on herkempi kuin perinteinen PCR.
• Tavanomaisella PCR: llä on erittäin heikko resoluutio, kun taas reaaliaikaisella PCR: llä voidaan havaita hyvin vähän muutoksia korkean resoluution takia.
• Perinteisen PCR: n päätepistetunnistuksella on lyhyt dynaaminen alue, kun taas reaaliaikaisella PCR-tunnistuksella on laaja dynaaminen alue.
• Toisin kuin tavanomainen PCR, automatisoituja havaintotekniikoita löytyy reaaliaikaisista PCR-reaktioista.
• Perinteinen PCR on erittäin hienostunut ja työvoimavaltainen enemmän kuin reaaliaikainen PCR.
• Toisin kuin reaaliaikainen PCR, tavanomainen PCR ei voi erottaa kuolleita ja eläviä bakteereja.
• Reaaliaikainen PCR käyttää fluoresoivaa väriainejärjestelmää tuotteiden havaitsemiseen, kun taas tavanomainen PCR käyttää etidiumbromidia ja UV-valoa juovien visualisoimiseksi agaroosigeeliväliaineessa.
