Ero PCR: N Ja Reaaliaikaisen PCR: N Välillä

2024 Kirjoittaja: Mildred Bawerman | [email protected]. Viimeksi muokattu: 2023-12-16 08:38

PCR vs reaaliaikainen PCR

PCR- tai polymeraasiketjureaktio on mullistettu löytö modernissa molekyylibiologiassa, jonka kemisti Kary Mullis kehitti ensimmäisen kerran vuonna 1983. Se sallii yhden sekvenssin monimutkaisessa DNA: ssa monistamisen analyysia varten. PCR: n perusajatus on, että kaksi aluketta, jotka ovat komplementaarisia DNA-sekvenssin vastakkaisille säikeille, on suunnattu toisiaan kohti; alukkeet tuottavat komplementaarisia säikeitä, joista kukin sisältää toisen alukkeen. Tuloksena on siis suuri määrä sekvenssiä, joka vastaa DNA: ta, joka on kahden alukkeen välissä. DNA-polymeraasientsyymiä käytetään alukkeiden pidentämiseen PCR: ssä. DNA-polymeraasi on termostabiili entsyymi, ja sillä on kyky selviytyä korkeissa lämpötiloissa (94-95 ° C), joita käytetään matriisi-DNA: n denaturointiin.

PCR sisältää kolme vaihetta, nimittäin toistuvat denaturointikierrokset, alukkeiden hehkutus ja DNA: n synteesi. Tämän reaktion suorittamiseen käytetään lämpösyklilaitetta, jotta se voidaan ohjelmoida muuttamaan lämpötilaa nopeasti ja tarkasti. PCR: n sovelluksia ovat rikostutkinta, DNA-sormenjälki, taudinaiheuttajien havaitseminen ja varhaisten ihmislajien DNA: n analysointi.

Mikä on perinteinen PCR?

Perinteisessä PCR: ssä on kolme päävaihetta: DNA-monistusvaihe, PCR: n erottaminen ja tuotteiden havaitseminen. DNA-segmenttien erotus tehdään tyypillisesti agaroosigeelielektroforeesilla. Tuotteet värjätään sitten etheidiimibromidilla. Lopuksi havaitseminen saavutetaan visualisoimalla nauhat geeleille UV-valossa. Siksi tavanomaisen PCR: n lopputuloksia ei ilmaista numeroina. Normaalisti tavanomainen PCR pystyy havaitsemaan vain yhden parametrin.

Mikä on reaaliaikainen PCR?

Reaaliaikainen PCR voi havaita tuotteiden monistumisen, kun tuotteet syntetisoidaan. Teknologian kehittyessä PCR: stä on tullut erittäin suosittu tekniikka erityisesti bakteerien havaitsemiseksi ja tunnistamiseksi elintarvikkeissa. Reaaliaikainen PCR käyttää fluoresoivaa väriainejärjestelmää ja lämpösyklia, joka on varustettu fluoresoivalla ilmaisukyvyllä.

Mitä eroa on tavanomaisella PCR: llä ja reaaliaikaisella PCR: llä?

• Tavanomainen PCR on enemmän aikaa vievä, koska se käyttää geelielektroforeesia analysoimaan monistetut PCR-tuotteet. Sitä vastoin reaaliaikainen PCR on vähemmän aikaa vievä, koska se voi havaita amplifikaatiot reaktion alkuvaiheissa.

• Reaaliaikainen PCR kerää dataa PCR: n eksponentiaalisessa kasvuvaiheessa, kun taas perinteinen PCR kerää tietoja reaktion loppupisteessä.

• Tavanomaisen PCR: n loppupistetulokset eivät välttämättä ole kovin tarkkoja, mutta reaaliaikaisen PCR: n tulokset ovat hyvin tarkkoja.

• Reaaliaikainen PCR on herkempi kuin perinteinen PCR.

• Tavanomaisella PCR: llä on erittäin heikko resoluutio, kun taas reaaliaikaisella PCR: llä voidaan havaita hyvin vähän muutoksia korkean resoluution takia.

• Perinteisen PCR: n päätepistetunnistuksella on lyhyt dynaaminen alue, kun taas reaaliaikaisella PCR-tunnistuksella on laaja dynaaminen alue.

• Toisin kuin tavanomainen PCR, automatisoituja havaintotekniikoita löytyy reaaliaikaisista PCR-reaktioista.

• Perinteinen PCR on erittäin hienostunut ja työvoimavaltainen enemmän kuin reaaliaikainen PCR.

• Toisin kuin reaaliaikainen PCR, tavanomainen PCR ei voi erottaa kuolleita ja eläviä bakteereja.

• Reaaliaikainen PCR käyttää fluoresoivaa väriainejärjestelmää tuotteiden havaitsemiseen, kun taas tavanomainen PCR käyttää etidiumbromidia ja UV-valoa juovien visualisoimiseksi agaroosigeeliväliaineessa.