Keskeinen ero - immunofluoresenssi vs. immunohistokemia
Molekyylibiologisia menetelmiä käyttävä tautidiagnostiikka on tullut kliinisen laboratoriotekniikan nousevaksi alueeksi. Se sisältää kaikki testit ja menetelmät taudin tunnistamiseksi ja taudin syyn ymmärtämiseksi analysoimalla organismin DNA: ta, RNA: ta tai ekspressoituneita proteiineja. Molekyylidiagnostiikan nopea kehitys on mahdollistanut tarttuvien ja ei-tarttuvien sairauksien perustutkimuksen. Näitä käytetään määrittämään muutokset sekvenssissä tai ilmentymistasoissa taudissa mukana olevissa ratkaisevissa geeneissä tai proteiineissa. Immunofluoresenssi (IF) ja immunohistokemia (IHC) ovat kaksi tällaista laajasti käytettyä tekniikkaa syöpäbiologiassa. IF on eräänlainen IHC, jossa fluoresenssin havaitsemismenetelmää käytetään monoklonaalisten ja polyklonaalisten vasta-aineiden analysointiin, kun taas IHC käyttää kemiallisia menetelmiä monoklonaalisten ja polyklonaalisten vasta-aineiden havaitsemiseksi. Tämä on keskeinen ero IF: n ja IHC: n välillä.
SISÄLLYS
1. Yleiskatsaus ja keskeinen ero
2. Mikä on immunofluoresenssi
3. Mikä on immunohistokemia
4. Immunofluoresenssin ja immunohistokemian yhtäläisyydet
5. Rinnakkainen vertailu - immunofluoresenssi vs immunohistokemia taulukkomuodossa
6. Yhteenveto
Mikä on immunofluoresenssi (IF)?
Immunofluoresenssi on ilmaisutekniikka, jossa määrityksessä käytetyt vasta-aineet leimataan käyttämällä fluoresoivia väriaineita tai fluoresoivia proteiineja havaitsemista varten. Leimatut sekundääriset vasta-aineet voivat johtaa ei-toivottuihin taustasignaaleihin; siksi IF-tekniikka perustuu tällä hetkellä itse primaarivasta-aineen leimaamiseen ei-toivottujen signaalien välttämiseksi detektoinnin aikana. Tällä tekniikalla estetään epäspesifinen sitoutuminen primaarisen ja sekundaarisen vasta-aineen välillä, ja se on nopeampi, koska sekundaarista inkubointivaihetta ei ole mukana. Myös tietojen laatua parannetaan.
Kuva 01: Kaksinkertainen immunofluoresenssivärjäys BrdU: lle, NeuN: lle ja GFAP: lle
Fluorokromit tai fluoresoivat väriaineet ovat yhdisteitä, jotka voivat absorboida säteilyä, edullisesti ultraviolettisäteilyä, joka on innoissaan. Kun hiukkaset saavuttavat perustilan viritetystä tilasta, ne lähettävät säteilyä, jonka detektori sieppaa ja havaitsee spektrin muodostamiseksi. On erittäin tärkeää, että fluoresoiva leima on yhteensopiva ja stabiili kyseiselle reaktiolle ja että se tulisi konjugoida vasta-aineeseen tarkkojen tulosten saamiseksi. Yksi käytetyimmistä fluorokromeista on fluoreseiini-isotiosyanaatti (FITC), joka on vihreää ja jonka absorptio- ja emissiohuippuaallonpituudet ovat vastaavasti 490 nm ja 520 nm. Rodamiini, toinen IF: ssä käytetty aine, on väriltään punaista ja sillä on erilliset absorptio- ja emissiohuippujen aallonpituudet 553 nm ja 627 nm.
Mikä on immunohistokemia (IHC)?
IHC on molekyylitestimenetelmä, jota käytetään antigeenin läsnäolon tunnistamiseksi ja vahvistamiseksi kohdesolussa. Kohdesolu voi olla tarttuva partikkeli, mikrobipatogeeni tai pahanlaatuinen kasvainsolu. IHC käyttää monoklonaalisia ja polyklonaalisia vasta-aineita määrittääkseen kohdesolujen solupinnalla olevien antigeenien läsnäolon. Tekniikka perustuu antigeeni-vasta-aineen sitoutumiseen. Detektiomarkkeri konjugoidaan näihin vasta-aineisiin tietyn antigeenin läsnäolon tai puuttumisen havaitsemiseksi. Nämä markkerit voivat olla kemiallisia markkereita, kuten entsyymejä, fluoresoivasti leimattuja vasta-aineita tai radioleimattuja vasta-aineita.
Kuva 02: Hiiri-aivolohko värjätään immunohistokemialla
IHC: n suosituin sovellus on syöpäsolubiologiassa pahanlaatuisten kasvainten läsnäolon tunnistamiseksi, mutta sitä käytetään myös tartuntatautien havaitsemiseen.
Mitkä ovat immunofluoresenssin ja immunohistokemian yhtäläisyydet?
- Immunofluoresenssi ja immunohistokemia tapahtuvat in vitro -olosuhteissa.
- Molemmat tekniikat perustuvat antigeeni-vasta-aineeseen
- Molemmat ovat erittäin nopeita tekniikoita.
- Menetelmien tulokset ovat toistettavissa.
- Molemmilla on parantunut tietojen laatu.
- Näitä tekniikoita käytetään syövän ja tartuntatautien diagnostiikassa.
Mikä on ero immunofluoresenssin ja immunohistokemian välillä?
Erilainen artikkeli keskellä taulukkoa
Immunofluoresenssi vs. immunohistokemia |
|
| IF on detektiotekniikka, jossa määrityksessä käytetyt vasta-aineet leimataan käyttämällä fluoresoivia väriaineita tai fluoresoivia proteiineja havaitsemiseen. | IHC on detektiotekniikka, jossa määrityksessä käytetyt vasta-aineet leimataan käyttämällä kemikaaleja tai radioaktiivisia elementtejä havaitsemiseen. |
| Tarkkuus | |
| Tarkkuus on korkeampi IF-tekniikassa kuin IHC. | Tarkkuus on pienempi IHC: ssä. |
| Tarkkuus | |
| IF on tarkempi. | IHC on vähemmän spesifinen. |
Yhteenveto - immunofluoresenssi vs. immunohistokemia
Molekyylimekanismit ovat saaneet aikaan monia muutoksia lääketieteen alalla, mikä on johtanut edistyneisiin molekyylitestimenetelmiin, jotka ovat saaneet aikaan mullistuksia diagnostiikan alalla. Nämä keksinnöt ovat johtaneet taudin nopeaan ja tarkkaan tunnistamiseen ja vahvistamiseen, mikä on mahdollistanut lääkkeiden onnistuneen antamisen ja tuotannon. Näitä tekniikoita käytetään myös farmakologiassa lääkkeiden kohteiden löytämiseksi ja lääkkeen farmakokineettisten ominaisuuksien vahvistamiseksi lääkeaineenvaihdunnan aikana. IF ja IHC ovat kaksi diagnostista menetelmää, jotka perustuvat antigeenin ja vasta-aineen sitoutumisen käsitteeseen, vaikka havaitsemistapa molemmissa tekniikoissa eroaa. IF käyttää antigeenin havaitsemiseksi fluoresenssin periaatetta ja IHC käyttää kemiallisen konjugaation käsitettä antigeenin havaitsemiseksi. Tämä on ero IF: n ja IHC: n välillä.
Lataa PDF-versio immunofluoresenssista vs immunohistokemia
Voit ladata tämän artikkelin PDF-version ja käyttää sitä offline-tarkoituksiin lainausviestin mukaan. Lataa PDF-versio täältä Immunofluoresenssin ja immunohistokemian välinen ero.
