Tärkein ero - In situ -hybridisaatio vs. immunohistokemia
Syöpä- ja tartuntatautidiagnostiikka on suosittu trendi, jossa uusia proteomiikkaan ja genomiikkaan perustuvia tekniikoita käytetään kasvainten tai tarttuvien solujen, niiden lisääntymisen ja solujen kehittymispaikkojen tunnistamiseen ja useimpien tarttuvien ja ei-tarttuvien tautien geneettisen perustan analysointiin. Tämä johtaa lääkkeiden tarkkaan käsittelyyn ja suunnitteluun sekä sairauksien mukautettujen hoitomuotojen kehittämiseen. In situ -hybridisaatio (ISH) ja immunohistokemia (IHC) ovat kaksi niin laajasti käytettyä tekniikkaa syöpäbiologiassa, ja keskeinen ero in situ -hybridisaation ja immunokemian välillä on molekyyleissä, joita käytetään analyysimenetelmässä. ISH: ssa nukleiinihappokoettimia käytetään analyysissä, kun taas IHC: ssä diagnostisiin määrityksiin käytetään monoklonaalisia ja polyklonaalisia vasta-aineita.
SISÄLLYS
1. Yleiskatsaus ja keskeinen ero
2. Mikä on hybridisaatio tilanteessa
3. Mikä on immunohistokemia
4. Samankaltaisuudet tilanteessa tapahtuvan hybridisaation ja immunohistokemian välillä
5. Rinnakkainen vertailu - tilannehybridisaatio vs. immunohistokemia taulukkomuodossa
6. Yhteenveto
Mikä on in situ -hybridisaatio (ISH)?
In situ -hybridisaatio on nukleiinihappohybridisaatiotekniikka, joka suoritetaan suoraan kudoksen osalle tai osalle, koko kudokseen tai soluihin. Tekniikka riippuu Watson Crickin komplementaarisen emäsparin muodostamisen teoriasta, jolloin saadaan joko DNA-DNA-hybridit tai DNA-RNA-hybridit, jotka voivat havaita mutatoituja geenejä tai tunnistaa tarvittavan kiinnostavan geenin. Yksisäikeisiä DNA-sekvenssejä, kaksisäikeisiä DNA-sekvenssejä, yksijuosteisia RNA-sekvenssejä tai synteettisiä oligonukleotidisekvenssejä käytetään koettimina hybridisaatiotekniikan aikana, ja nämä koettimet leimataan radioaktiivisella fosforilla sen 5'-päässä tunnistamismenettelyjä varten autoradiografialla tai leimataan fluoresoivilla väreillä. Saatavilla on erityyppisiä ISH-tekniikoita käytetyn koettimen tyypin ja käytetyn visualisointitekniikan tyypin perusteella.
Kuva 01: Fluoresoiva in situ -hybridisaatio
ISH: ta on monia sovelluksia, pääasiassa tartuntatautien molekyylidiagnostiikassa, jotta voidaan tunnistaa taudinaiheuttajat ja vahvistaa taudinaiheuttaja molekyylidiagnostiikan avulla. Sitä käytetään myös kehitysbiologian, kariotyypin ja filogeneettisen analyysin sekä kromosomien fyysisen kartoituksen alueilla.
Mikä on immunohistokemia (IHC)?
IHC-tekniikassa pääanalyysimolekyyli on antigeeni. IHC: n aikana monoklonaalisia ja polyklonaalisia vasta-aineita käytetään antigeenien läsnäolon määrittämiseen infektion tai pahanlaatuisen soluproliferaation tilan perusteella. Tekniikka perustuu antigeeni-vasta-aineen sitoutumiseen, ja entsyymileimat käytetään tähän tekniikkaan; yksi tällainen sovellus on ELISA (entsyymiin liittyvä immunosorbenttimääritys). Markkerit voivat olla myös fluoresoivia leimattuja vasta-aineita tai radioleimattuja vasta-aineita.
Kuva 02: Immunohistokemia
IHC: tä käytetään laajalti syöpäsolujen havaitsemiseen. Diagnostiset toimenpiteet kohdistuvat kasvainsoluissa oleviin antigeeneihin kasvaimen tunnistamiseksi ja luonnehtimiseksi. Sama menettely sisältyy tartuntatautien diagnosointiin. Monoklonaalisia ja polyklonaalisia vasta-aineita käytetään myös erilaisten geenituotteiden analysointiin mahdollistamalla vasta-aine-antigeeni-sitoutumisreaktio halutun proteiinin ja annetun synteettisen vasta-aineen välillä.
Mitkä ovat yhtäläisyydet in situ -hybridisaation ja immunohistokemian välillä?
- ISH ja IHC ovat erittäin spesifisiä reaktioita.
- Molemmat tekniikat ovat erittäin tarkkoja.
- Molempia tekniikoita voidaan käyttää syövän ja tartuntatautien diagnostiikassa.
- Nämä tekniikat suoritetaan steriileissä in vitro -ympäristöissä.
- Molemmat ovat nopeita tekniikoita, jotka tuottavat toistettavia tuloksia.
- ISH ja IHC käyttävät detektiomenetelmiä, kuten radioleimausta, ja fluoresenssitekniikoita.
Mikä on ero tilanteessa tapahtuvan hybridisaation ja immunohistokemian välillä?
Erilainen artikkeli keskellä taulukkoa
In situ -hybridisaatio vs. immunohistokemia |
|
| ISH on nukleiinihappohybridisaatiotekniikka, joka suoritetaan suoraan kudoksen osalle tai osalle tai koko kudokselle. | IHC on tekniikka, jossa monoklonaalisia ja polyklonaalisia vasta-aineita käytetään määrittämään antigeenit, jotka ovat solupinnoille asetettuja erityisiä proteiinimarkkereita. |
| Analysoitujen biomolekyylien tyyppi | |
| ISH analysoi nukleiinihappoja. | IHC analysoi proteiinit-antigeenit. |
| Biokemiallisen reaktion perusta | |
| Tässä tekniikassa tapahtuu täydentävä emäsparitus DNA-DNA: n tai DNA-RNA: n välillä. | Antigeeni-vasta-aine-vuorovaikutukset ovat mukana immunohistokemiassa. |
| Entsyymiin liitetyt detektiomenetelmät | |
| Entsyymiin liittyviä detektiomenetelmiä ei voida käyttää ISH: ssa. | Entsyymisidottuja detektiomenetelmiä voidaan käyttää IHC: ssä. |
Yhteenveto - In situ -hybridisaatio vs. immunohistokemia
Molekyylidiagnostiikka on nopeita ja vahvistavia menetelmiä, joita voidaan käyttää tunnistamaan ei-tarttuva tauti, kuten syöpä tai tarttuvat taudit, kuten HIV tai tuberkuloosi, soluissa olevien molekyylimerkkien perusteella, jotka johtavat taudin ilmenemiseen. Molekyylimarkkereita voi olla läsnä ekspressoitujen proteiinien muodossa tai geneettisellä tasolla, johon perustuen otetaan käyttöön erilaisia uusia tekniikoita tehokkuuden lisäämiseksi ja jotka ovat vähemmän työläitä, vaikka näihin tekniikoihin liittyy korkea hinta. Siten ISH riippuu DNA-DNA- tai DNA-RNA-hybridimuodostuksesta ja IHC riippuu vasta-aineen ja antigeenin välisistä spesifisistä reaktioista. Tämä on ero in situ -hybridisaation välillä.
Lataa PDF-versio In In situ -hybridisaatiosta vs immunohistokemia
Voit ladata tämän artikkelin PDF-version ja käyttää sitä offline-tarkoituksiin lainausviestin mukaan. Lataa PDF-versio täältä Ero in situ -hybridisaation ja immunohistokemian välillä.
