Sisällysluettelo:
- Tärkein ero - T4 vs T7 DNA-ligaasi
- Mikä on DNA-ligaasin toiminta?
- Mikä on T4-DNA-ligaasi?
- Mikä on T7-DNA-ligaasi?
- Mitkä ovat yhtäläisyydet T4- ja T7-DNA-ligaasien välillä?
- Mikä on ero T4- ja T7-DNA-ligaasin välillä?
- Yhteenveto - T4 vs T7 DNA-ligaasi
Video: Ero T4- Ja T7-DNA-ligaasien Välillä
2024 Kirjoittaja: Mildred Bawerman | [email protected]. Viimeksi muokattu: 2023-12-16 08:38
Tärkein ero - T4 vs T7 DNA-ligaasi
DNA-ligaasi on tärkeä entsyymi, jota käytetään molekyylibiologian tekniikoissa. Se toimii molekyyliliimana liittämään nukleotidit muodostamalla fosfodiesterisidoksia nukleotidien välille. Fosfodiesterisidokset muodostuvat sokeriosan 3'-hydroksyylipään ja 5'-pääfosfaattiryhmän välille. DNA-ligaasi on elintärkeä replikointiprosessissa jäljessä olevan juosteen Okazaki-fragmenttien liittämiseksi sekä DNA-korjausmekanismien ja in vitro -kloonauskokeiden aikana halutun kiinnostavan geenin liittämiseksi vektorigenomiin. Molekyylibiologit käyttävät tällä hetkellä kahta pää-DNA-ligaasia: T4- ja T7-DNA-ligaasit. T4-DNA-ligaasi on yksi ensimmäisistä entsyymeistä, joka eristetään T4-bakteriofagista. T7-DNA-ligaasi, joka on pienempi proteiini, on T7-bakteriofagista eristetty entsyymi. Tämä on keskeinen ero T4- ja T7-DNA-ligaasien välillä.
SISÄLLYS
1. Yleiskatsaus ja keskeinen ero
2. Mikä on DNA-ligaasin vaikutus
3. Mikä on T4-DNA-ligaasi
4. Mikä on T7-DNA-ligaasi
4. T4- ja T7-DNA-ligaasin yhtäläisyydet
5. Vertailu vierekkäin - T4 vs. T7-DNA-ligaasi taulukkomuodossa
6. Yhteenveto
Mikä on DNA-ligaasin toiminta?
DNA-ligaatio tapahtuu kolmivaiheisessa reaktiossa. Ensimmäinen vaihe on nukleofiilinen hyökkäys ATP: n alfa-fosforia vastaan, jolloin muodostuu kovalenttinen entsyymi-adenylaattivälituote, jossa AMP on kytketty lysiinin terminaaliseen sivuketjuun. Toisessa vaiheessa nukleofiilinen hyökkäys tapahtuu entsyymi-adenylaatin fosforilla 5'-fosfaatilla päättyvän DNA-substraatin kautta, mikä vapauttaa lysiiniä ja muodostaa DNA-adenylaatin. Viimeisessä vaiheessa DNA-adenylaattia hyökkää toisen DNA-juosteen 3'-OH, mikä vapauttaa AMP: n ja yhdistää polynukleotidit.
Mikä on T4-DNA-ligaasi?
T4-ligaasi oli ensimmäinen ligaasi, joka eristettiin ja tunnistettiin Meselsonin, Weiglen ja Kellenbergerin toimesta, ja se oli kaikkien aikojen ensimmäinen tuotettu kaupallinen ligaasi. T4-DNA-ligaasi on ATP-riippuvainen entsyymi, joka katalysoi fosfodiesterisidoksen muodostumista. Se on yksi polypeptidiketju, jossa on 487 aminohappotähdettä ja jonka molekyylipaino on noin 77 kDa. Optimaalinen pH sen aktiivisuudelle on välillä 7,5 - 8.
Kuva 01: T4-DNA-ligaasi
T4-DNA-ligaasia, kuten nimestäkin voi päätellä, on läsnä bakteriofaagissa T4 ja se eristettiin, kun faagi tuotti entsyymin E. coli -infektiolla. Entsyymi ligoi kaksoisjuosteiset DNA-dupleksit, joissa on tylpät päät, ja sidottavien fragmenttien tulisi olla lähellä toisiaan.
Mikä on T7-DNA-ligaasi?
T7-ligaasi on 41 kDa: n proteiinia, jonka tuottaa T7 Bacteriophage, ja se eristetään infektoimalla E. coli -soluja. T7-ligaasin päätehtävä on ligatoida DNA-dupleksit fosfodiesterisidosten kautta ja liittää läheiset DNA-fragmentit kloonauskokeiden aikana. Optimaalinen pH T7-DNA-ligaasille on välillä 7,0 - 7,2. T7-ligaasi on ATP-riippuvainen. T7-DNA-ligaasit pystyvät myös hehkuttamaan DNA- ja RNA-hybridit aiheuttaen epänormaaleja konformaatioita transkription aikana; tätä ilmiötä tutkitaan kuitenkin edelleen in vitro -tutkimuksissa.
Mitkä ovat yhtäläisyydet T4- ja T7-DNA-ligaasien välillä?
- T4- ja T7-DNA-ligaasit osallistuvat ligaatioreaktioon hehkuttamalla DNA-duplekseja muodostamalla fosfodiesterisidoksen muodostamalla DNA-fragmentin 3'-OH- ja 5'-fosfaattipäät.
- Molemmat entsyymit ligatoivat tylpien DNA-duplekseja, jotka ovat lähellä toisiaan.
- Molemmat entsyymit ovat ATP-riippuvaisia.
- Nämä entsyymit eristetään infektoimalla E. coli -solut tietyllä bakteriofaagilla.
-
Molempien entsyymien sovelluksiin kuuluvat:
- Molekyylikloonaus - kiinnittämään mielenkiinnon kohteena oleva geeni vektoriin
- DNA-korjaus - kaksisäikeisten markkinarakojen korjaamiseen
- DNA: n replikaatio in vitro
- Ligaasiketjureaktio
Mikä on ero T4- ja T7-DNA-ligaasin välillä?
Erilainen artikkeli keskellä taulukkoa
T4 vs T7 DNA-ligaasi |
|
T4-DNA-ligaasityyppi DNA-ligaasia, joka on eristetty bakteriofaagista T4 ja osallistuu vierekkäisten DNA-fragmenttien ligaatioon fosfodiesterisidoksen muodostumisen kautta. | T7-DNA-ligaasityyppi DNA-ligaasia, joka on eristetty bakteriofaagista T7 ja osallistuu vierekkäisten DNA-fragmenttien ligaatioon fosfodiesterisidoksen muodostumisen kautta. |
Proteiinin koko | |
T4-DNA-ligaasin koko on 77 kDa - suurempi kuin T7-DNA-ligaasi. | T7-DNA-ligaasin koko on 41 kDa. |
Optimaalinen pH | |
pH-alue, joka toimii T4-DNA-ligaasilla, on 7,5 - 8,0. | pH-alue, joka toimii T7-DNA-ligaasilla, on 7,0 - 7,2. |
Yhteenveto - T4 vs T7 DNA-ligaasi
DNA-ligaasit ovat tärkeä entsyymiluokka, joka osallistuu molekyylikloonaukseen tuottamaan rekombinantti-DNA-molekyylejä, jotka sisältävät mielenkiinnon kohteena olevan geenin. Ligaatioreaktio on energiaa hyödyntävä reaktio, ja parhaillaan on käynnissä uusia tutkimuksia tarkkuuden parantamiseksi moduloimalla käytettävissä olevia ligaaseja. T4- ja T7-DNA-ligaasit ovat kahden tyyppisiä tärkeitä DNA-ligaasientsyymejä, joita käytetään molekyylibiologisissa tekniikoissa. T7-DNA-ligaasi on myös tulosta tutkimuksesta, joka perustui T4-infektoidusta E. colista eristettyyn primaariseen ligaasiin. T7 on kuvattu enemmän tehokkuutta ja tarkkuutta tehtävänsä suorittamisessa sen pienemmän koon vuoksi. Tämä on ero T4- ja T7-ligaasin välillä.
Lataa PDF-versio T4 vs T7 DNA-ligaasista
Voit ladata tämän artikkelin PDF-version ja käyttää sitä offline-tarkoituksiin lainausmerkintöjen mukaan. Lataa PDF-versio täältä. Ero T4: n ja T7: n välillä.
Suositeltava:
Ero Siirtogeenisten Ja Koputtavien Hiirten Välillä
Tärkein ero siirtogeenisten hiirien ja tyrmäyshiirien välillä on, että siirtogeenisten hiirten genomiin on lisätty vieraita geenejä, kun taas knockout-hiirillä on func
Ero Nousevan Ja Laskevan Paperikromatografian Välillä
Keskeinen ero nousevan ja laskevan paperikromatografian välillä on se, että nouseva paperikromatografia käsittää liuottimen liikkeen
Ero Vatsan Proteiinien Ruoansulatuksen Ja Pienen Suoliston Välillä
Tärkein ero proteiinin pilkkomiseen mahassa ja ohutsuolessa on, että proteiinin pilkkominen mahassa tapahtuu pepsiinin ja suolahapon avulla
Ero Anthronen Ja DNSA-menetelmän Välillä
Tärkein ero Anthrone- ja DNSA-menetelmien välillä on, että Anthrone-testi on yleinen testi kaikenlaisten hiilihydraattien havaitsemiseksi, kun taas DNSA-menetelmä on qua
Ero Contigin Ja Telineiden Välillä
Tärkein ero jatkoksen ja telineen välillä on se, että jatkossa ei ole aukkoja, kun teline koostuu jatkoista ja aukoista. Multin genomin sekvensointi