Tärkein ero - pinoamisgeeli vs. erotusgeeli
Termejä pinoamisgeeli ja erotusgeeli käytetään selittämään SDS-PAGE-tekniikkaa. SDS-PAGE tai natriumdodekyylisulfaatti-polyakryyliamidigeelielektroforeesi on laboratoriotekniikka, jota käytetään proteiinimolekyylien erottamiseen niiden molekyylipainon perusteella. Tekniikan taustalla oleva teoria on, että proteiineilla, joilla on erilainen molekyylipaino, on erilainen migraatioaste; matalamolekyyliset molekyylit kulkeutuvat nopeammin, kun taas suurmolekyylipainoiset molekyylit vaeltavat hitaasti. Migraatioväliaine on geeli. On olemassa kahden tyyppisiä geelejä, jotka on nimetty pinoamisgeeliksi ja erotusgeeliksi. Tärkein ero pinoamisgeelin ja erotusgeelin välillä on, että pinoamisgeelin pH on 6,8, kun taas erotusgeelin pH on 8,8.
SISÄLLYS
1. Yleiskatsaus ja keskeinen ero
2. Mikä on pinoamisgeeli
3. Mikä on geelin erottaminen
4. Pinoamisgeelin ja erottavan geelin suhde
5. Vertailu vierekkäin - pinoamisgeeli vs. erottava geeli taulukkomuodossa
6. Yhteenveto
Mikä on pinoamisgeeli?
Pinoamisgeeli on vähän väkevöity polyakryyliamidigeeli, joka asetetaan väkevämmän erotusgeelin (erotusgeeli) päälle SDS-PAGE-tekniikassa. Pinoamisgeeliä käytetään parantamaan elektroforeesin erottuvuutta. Resoluutio kasvaa pinontageelin ja erottavan geelin konsentraatioiden välillä, jotka vaikuttavat näytteen proteiineihin. Koska polyakryyliamidin pitoisuus pinontageelissä on pieni, huokoskoko on suurempi. Tämä auttaa myös lisäämään erottelua.
Pinoamisgeeli on löysä polyakryyliamidigeeli, jonka huokoset ovat noin 7% polyakryyliamidia. Nämä huokoset eivät toimi merkittävänä esteenä suurille proteiinimolekyyleille. Siksi tämä geeli vaikuttaa hieman näiden proteiinien liikkuvuuteen. Tämä tekee erottamisen proteiinin liikkuvuuden ja koon mukaan keskittämällä ne kahden geelin väliin.
Kuva 01: SDS-PAGE-akryyliamidigeeli
Pinoamisgeelin pH on 6,8. Sen pH on hapan kuin geelin erottamisella 2 pH-yksiköllä. Tämä pH tarkoittaa pienempää ionivahvuutta ja siten suurempaa sähköistä vastusta. Tämä provosoi proteiinien liikkuvuuden kuin muut geelissä olevat varautuneet hiukkaset.
Mikä on erottava geeli?
SDS-PAGEtechnique -geelin erotusgeeli tai erotusgeeli on erittäin väkevöity polyakryyliamidigeeli, joka asetetaan vähän väkevöidyn pinoamisgeelin päälle. Erotusgeeli sisältää suuren määrän polyakryyliamidia (10%). Tämän geelin pH pidetään pH-arvossa 8,8, mikä on korkeampi pH-taso kuin pinoamisgeelin.
Kuva 02: Geelielektroforeesilaite
Kun proteiinimolekyylit saavuttavat erotusgeelin, näiden molekyylien migraatio hidastuu, koska erotusgeeli on korkean konsentraation geeli, jolla on pieni huokoskoko, joka voi toimia huomattavana esteenä proteiinimolekyylien liikkumiselle. Tämän hidastumisen ansiosta muut proteiinit kulkeutuvat hitaasti kiinni, mikä johtaa kapeaan, väkevään vyöhykkeeseen kahden geelin väliin.
Mikä on pinoamisgeelin ja erottavan geelin suhde?
Sekä pinoamisgeeliä että erotusgeeliä käytetään samassa laitteessa
Mikä on ero pinoamisgeelin ja erotusgeelin välillä?
Erilainen artikkeli keskellä taulukkoa
Pinoamisgeeli vs erotusgeeli |
|
| Pinoamisgeeli on vähän väkevöity polyakryyliamidigeeli, joka asetetaan väkevämmän erotusgeelin (erotusgeeli) päälle SDS-PAGE-tekniikassa. | SDS-PAGE-tekniikan erotusgeeli tai erotusgeeli on erittäin väkevöity polyakryyliamidigeeli, joka asetetaan vähän väkevöidyn pinoamisgeelin päälle. |
| Sijoittaminen | |
| Pinoamisgeeli asetetaan erottavan (erottavan) geelin päälle. | Erotusgeeli asetetaan geelielektroforeesiin käytetyn astian pohjaan. |
| Keskittyminen | |
| Pinoamisgeelin pitoisuus on korkea. | Erotusgeelin pitoisuus on pieni. |
| Polyakryyliamidipitoisuus | |
| Pinoamisgeeli sisältää noin 7% polyakryyliamidia. | Erotusgeeli sisältää noin 10% polyakryyliamidia. |
| pH | |
| Pinoamisgeelin pH on 6,8. | Erotusgeelin pH on 8,8. |
| Huokoskoko | |
| Pinoamisgeelissä on suuria huokoskokoja. | Erotusgeelissä on pieniä huokoskokoja. |
| Resoluutio | |
| Pinoamisgeeli antaa paremman tarkkuuden. | Geelin erottaminen antaa heikon resoluution. |
Yhteenveto - pinoamisgeeli vs. erotusgeeli
Pinoamisgeeli ja erotusgeeli ovat kahden tyyppisiä polyakryyliamidigeelejä, joita käytetään proteiinimolekyylien parempaan erottamiseen tietyssä näytteessä. Pinoamisgeelin ja erotusgeelin välinen ero on, että pinontageelin pH on 6,8, kun taas erotusgeelin pH on 8,8.
